非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒(夹心法)使用说明书
名称: 非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒
预期用途: 本试剂盒用于检测猪血清中非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体。
实验原理:
本试剂盒应用双抗原夹心法测定样本中是否含有非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体。用重组的 ASFV 抗原包被微孔板,制成固定相,往包被抗原的微孔中加入样本,再与 HRP 标记的ASFV 抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过洗涤后加底物 TMB 显色。TMB在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下最终转化成黄色。颜色的深浅和样品中的非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体含量呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过 OD 值计算判断样本中是否含有非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体。
试剂盒组成:
试剂准备:
1. 1×洗涤液配制:取混匀后20×浓缩洗涤液至去离子水中20倍稀释。
2. 1×样品稀释液配制:取混匀后20×样品稀释液至去离子水中20倍稀释。
3. 样本准备:使用前用 1×样品稀释液将样本稀释10倍(建议20微升血清,180微升样本稀释液)。
4. 底物液的配制(现配现用):使用前将显色液 A、显色液B按体积比 1:1混合,避光。
实验流程:
使用前将试剂盒的所有组分和待检样本平衡至室温。
1. 按前述试剂准备项准备好各种试剂、阴阳性参考品和待测样本;
2. 计算检测样本所需酶标条,将酶标条从铝箔袋取出,剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口,低温保存;
3. 样本孵育:分别加入阴性对照、阳性对照和待测样本,并做好记录,100μL/孔,混匀;再将酶标抗原分别加入微孔板中,50μL/孔,混匀后贴膜,37℃孵育30分钟;
4. 洗板:弃去孔中液体,加入1×洗涤液(300 μL/孔)洗板五次,拍干;
5. 显色:将预先配制的底物液加入微孔板中,100 μL/孔,混匀,37℃避光孵育10分钟;
6. 终止:加入100 μL/孔终止液至微孔板中,轻轻震动微孔板至显色均匀;
7. 读值:20分钟内读取450nm的光吸收值。
结果判定:
1. ASFV阴性参考品的OD值记为ODN;ASFV阳性参考品的OD值记为ODP;样品的OD值记为ODS;
2. Cut Off值(阈值)的计算:Cut Off值=ODN+0.15;
3. 试验成立条件:ODN值≤0.15且ODP值≥0.5,试验结果有效,否则重新进行试验;
4. 结果判定:样本的OD值≤Cut Off值,结果判为阴性;样本的OD值>Cut Off值,结果判为阳性。
注意事项:
1. 请严格按照说明书操作。
2. 本试剂盒应该由经过充分培训的人员使用。
3. 不同批号的试剂盒不能混用。
4. 本试剂盒各组分只能一次性使用,不能重复使用。
5. 整个实验过程应尽量在干净无尘的环境下进行。
6. 本试剂盒与待检样本使用前必须平衡至室温。
7. 浓缩洗涤液使用前需 20 倍稀释,若洗液出现结晶,可置 37℃使之溶解。
8. 为了避免样本中任何潜在的生物危险,检测样本应视为具有传染性物质,避免接触到皮肤和粘膜。
9. 洗板机在每天使用时应进行校正注液量和残留量,注意管道是否通畅。洗涤时,确认每孔中洗涤液都注满微孔。每次洗涤后都需在无尘吸水纸上拍干微孔中的液滴。在洗板结束后应立即进行下一步,不可使酶标板干燥。避免较长时间中断实验步骤,以确保每孔实验条件均一。
10. 如质控品测值不在预期范围内,则该次实验无效,应重复实验。
11. 本试剂盒中所有试剂应置于2-8℃保存,有效期为12个月。板条若未能一次用完,剩余板条用塑料袋封口后密封保存。
12. 此试剂盒仅用于体外诊断。
生产企业:
企业名称: 肇庆2022世界杯官方生物药品有限公司
地址: 广东省肇庆高新技术产业开发区创业路 5 号
邮政编码: 526238
电话: 0758-3626976